人26S蛋白酶體(26S PSM)elisa試劑盒 參數(shù):
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| F3469-A | 人26S蛋白酶體(26S PSM)elisa試劑盒 | Human 26S proteasome,26S PSM elisa Kit | 48T |
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人26S蛋白酶體(26S PSM)elisa試劑盒 廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,我們來(lái)介紹一下更簡(jiǎn)便的操作說明,編號(hào):F3469-A,英文名稱Human 26S proteasome,26S PSM elisa Kit
1、人26S蛋白酶體(26S PSM)elisa試劑盒 操作方法一用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:(1).包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。 (2).加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。 (3).加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。 (4).加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。 (5).終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。 (6).結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
2、人26S蛋白酶體(26S PSM)elisa試劑盒 操作方法二:用于檢測(cè)未知抗體的間接法: (1).用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。 (2).加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)(3).于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,最后一遍用DDW洗滌。 (4).于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘 (5).于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml (6).可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。 ELISA是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗(yàn)又可以用于少量標(biāo)本的檢測(cè),既可以做定性試驗(yàn)也可以做定量分析等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。
3、臨床標(biāo)本的收集和保存 用于ELISA測(cè)定的臨床標(biāo)本最為常用的是血清(漿),有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對(duì)用于激素和治療藥物測(cè)定的血清標(biāo)本的收集,要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,會(huì)有一峰值出現(xiàn):生長(zhǎng)激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,在測(cè)定此類激素時(shí),有必要在密切相連的時(shí)間間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本,以其中間值為測(cè)定值。又如當(dāng)從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí),血清中腎素活性將出現(xiàn)明顯增高。再如治療藥物的檢測(cè),應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的最適時(shí)間抽血檢測(cè)。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢測(cè)的血清標(biāo)本的收集則沒有時(shí)間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮。
(1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。(3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。(5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
4、試劑準(zhǔn)備 在臨床實(shí)驗(yàn)室,對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意,通常的做法是,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題,其直接的后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性。因此在ELISA測(cè)定中試劑的準(zhǔn)備最為關(guān)鍵的是,在實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20分鐘以上后,再進(jìn)行測(cè)定,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,以滿足測(cè)定要求。其次,目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋配制,因此稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。此外,當(dāng)試劑盒以O(shè)PD為底物時(shí),則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制。

在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中,血清樣本的加入幾乎是唯一的要使用微量加樣器加入樣本的步驟。使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是:加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快,無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。試劑的加入在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會(huì)在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,從而引起非特異顯色。所以,有時(shí)候一份標(biāo)本用相同的試劑盒這次測(cè)定為陽(yáng)性,下次測(cè)定為陰性,往往就是上述加樣及試劑的錯(cuò)誤所致。
四、溫育溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗最為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比,即溫度越高,則所需時(shí)間相對(duì)較短。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。溫育這一步是臨床ELISA測(cè)定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國(guó)內(nèi)ELISA商品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 30分鐘~1小時(shí),進(jìn)口ELISA試劑盒則通常為37℃ 1~2小時(shí)才能有較完全的結(jié)合,低于1小時(shí),可能會(huì)影響測(cè)定下限。因此,關(guān)于溫育,在實(shí)際測(cè)定操作中一定要注意以下幾點(diǎn):要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間。一般來(lái)說,加完樣本和/或反應(yīng)試劑后,將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí),孔內(nèi)溫度從室溫升至37℃,需要一定的時(shí)間,尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下,這段升溫時(shí)間可能還比較長(zhǎng),而在臨床實(shí)驗(yàn)室中,很少有人注意這個(gè)問題,通常是將微孔板一放入溫箱即開始計(jì)時(shí),這樣就很容易造成實(shí)際測(cè)定中溫育時(shí)間不夠,弱陽(yáng)性樣本測(cè)不出來(lái)的問題。曾有一地處南方的血站同行提出了一個(gè)問題,就是在每一年的冬季總有那么一個(gè)多月的時(shí)間,在做HBsAg測(cè)定的室內(nèi)質(zhì)控中,測(cè)定由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心供應(yīng)的1 ng/ml弱陽(yáng)性樣本時(shí),總是測(cè)不出來(lái),不知原因?yàn)楹危窟@可能就與南方冬天室內(nèi)溫度較低有關(guān),此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠,以致弱陽(yáng)性樣本測(cè)定為陰性。因此,為保證37℃下足夠的溫育時(shí)間,臨床實(shí)驗(yàn)室可自行確定本實(shí)驗(yàn)室不同季節(jié)(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長(zhǎng)時(shí)間孔內(nèi)溫度才能達(dá)到37℃,從而適當(dāng)延長(zhǎng)板條在溫箱中的放置時(shí)間。具體的做法是,用一小溫度計(jì)放置板孔反應(yīng)溶液中測(cè)量觀察即可。
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具有國(guó)家認(rèn)證 醫(yī)用 醫(yī)療器械注冊(cè)證
2-8℃衛(wèi)生院藥品冷藏箱價(jià)格【產(chǎn)品用途】:可用于儲(chǔ)存生物制品、藥品、試劑、疫苗等適用于醫(yī)院、藥房、制藥廠、衛(wèi)生所、高校實(shí)驗(yàn)、科研領(lǐng)域、食品加工行業(yè)、疾控中心等。
2-8℃衛(wèi)生院藥品冷藏箱價(jià)格【產(chǎn)品特色】:
1.風(fēng)冷結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì),確保內(nèi)部溫度恒定,均勻
2.排水系統(tǒng)確保箱內(nèi)無(wú)積水
3.獨(dú)立風(fēng)道設(shè)計(jì),實(shí)現(xiàn)空氣循環(huán)制冷,內(nèi)部為翅片式蒸發(fā)器,保證箱內(nèi)無(wú)霜
4.雙層中空鋼化玻璃門,帶熱反射膜,放置標(biāo)明凝露,展示效果更佳
2-8℃衛(wèi)生院藥品冷藏箱價(jià)格【安全保障】:完善的聲光報(bào)警功能:高溫、低溫、開門、系統(tǒng)故障報(bào)、電源異常、斷電報(bào)警、傳感器故障等多種報(bào)警功能,確保箱內(nèi)物品存放安全具備聲音蜂鳴報(bào)警、燈光閃爍報(bào)警、遠(yuǎn)程報(bào)警三種報(bào)警方式。
2-8℃衛(wèi)生院藥品冷藏箱價(jià)格【溫度控制】:電子溫控器精確控制,溫度LED大屏幕數(shù)字顯示,數(shù)字溫度顯示精度0.1℃,箱內(nèi)溫度2℃~8℃可調(diào)高精度電腦溫度控制系統(tǒng),帶獨(dú)立兩個(gè)溫度傳感器;數(shù)碼溫度顯示,可顯示箱內(nèi)實(shí)時(shí)溫度和各種設(shè)定參數(shù),故障提示功能,運(yùn)行狀態(tài)一目了然;電子打印溫度記錄儀全程跟蹤監(jiān)測(cè)溫度變化,便于問題追溯(可選配)。
2-8℃衛(wèi)生院藥品冷藏箱價(jià)格【人性化設(shè)計(jì)】:
內(nèi)置可調(diào)節(jié)擱架,方便使用帶密碼保護(hù)功能,防止隨意調(diào)整運(yùn)行參數(shù);門體帶把手開機(jī)延時(shí)保護(hù),避免同時(shí)啟動(dòng)造成電流過大影響其他設(shè)備及線路故障無(wú)霜冰箱設(shè)計(jì),不需人工或者設(shè)備自動(dòng)除霜內(nèi)設(shè)節(jié)能照明燈,燈管優(yōu)質(zhì)耐用,換燈簡(jiǎn)單易操作不影響正常使用內(nèi)置環(huán)??沙潆娂~扣電池,斷電報(bào)警48小時(shí)防凝露玻璃門設(shè)計(jì),帶鎖結(jié)構(gòu),安全可靠,在高溫高濕的環(huán)境下玻璃門不凝露壓縮機(jī)和風(fēng)機(jī):采用名牌全封閉高效壓縮機(jī)和風(fēng)機(jī);
BYC-250藥品冷藏箱技術(shù)參數(shù):
儲(chǔ)存溫度:2~8℃容積:250L尺寸:外部尺寸:580*560*1785(寬*深*高mm); 內(nèi)部尺寸:500*420*1090(寬*深*高mm);輸入功率:254W噪音:46db凈重:63kg工作條件:220V,50Hz擱架:4個(gè)(可選配)門鎖:安全門鎖設(shè)計(jì),外門配鎖1個(gè)樣式:立式玻璃門隔熱層:聚氨酯發(fā)泡;外部材料:噴涂鋼板;內(nèi)部材料:噴涂鋼板;溫度記錄:電子打印溫度記錄儀(選配)
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符合GA10-2002標(biāo)準(zhǔn)材質(zhì):進(jìn)口阻燃、防水透氣層、隔熱層、舒適層織物復(fù)合布料。顏色:防護(hù)服的顏色為藏藍(lán)色應(yīng)用場(chǎng)合:適用于消防員在滅火救援時(shí)穿著的防護(hù)服特性:阻燃性能,損毀長(zhǎng)度≤10cm,續(xù)燃時(shí)間≤2s,透汽量≥5000g/m224h,TPP值≥28cal/cm2,耐靜水壓≥17000Pa,重量/套≤3.5kg規(guī)格:特號(hào)、1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)