人S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)的含量。
實驗原理:
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)水平。用純化的人S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7),再與HRP標(biāo)記的S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人S100鈣結(jié)合蛋白A7/鈣粒蛋白A(S100A7)濃度。
試劑盒組成:
(20ml×20倍)×1瓶 |
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為72ng/ml,48 ng/ml ,24 ng/ml,12ng/ml, 6ng/ml)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
注意事項:
1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存。
7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
計算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋
倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值
代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋
倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
(此圖僅供參考)
試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%
檢測范圍:
2ng/ml -90 ng/ml
保存條件及期:
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.期:6個月
技術(shù)參數(shù)
傳感器數(shù)量: 4個,也可使用1、2或3個 傳感器上方體積: 40ul 最小樣品體積: 100ul 工作溫度: 18-45°C,由軟件控制,控溫精度為:0.02°C 流動速率: 50-200 μl/min 清潔處理: 所有與液體接觸元件均可拆卸,并可在超聲波浴中清洗 傳感器晶體: 5MHz,直徑14 mm,拋光,金電極 頻率范圍:1-70MHz,(對于5MHz晶片,從7個頻率到13個泛頻,至65MHz) 最大時間分辨率,1個傳感器、1個頻率:~每秒200個數(shù)據(jù)點 水中最大質(zhì)量精度:~0.5 ng/cm2(5 pg/mm2) 水種常規(guī)質(zhì)量精度:~1.8 ng/cm2(18 pg/mm2) 水中最大耗散因子精度:~0.04?10-6 水種常規(guī)耗散因子精度:~0.1?10-6 液體處理能力 X/Y/Z三維進(jìn)樣器,含固定樣品架;四通道取樣臂,與QCM-D流動模塊的進(jìn)口、出口和蠕動泵連接 取樣臂速度:350 mm/s(X與Y方向)和 125 mm/s(Z方向) 樣品數(shù)量, 標(biāo)準(zhǔn)配置 80個 (20 x 4),9 ml樣品管; 44個 (11x 4),20 ml樣品管
主要特點
E4 Auto作為Q-Sense公司具有耗散因子檢測功能的第三代石英晶體微量天平,采用全自動液體處理系統(tǒng),四通道進(jìn)樣裝置由程序設(shè)定,可自動完成進(jìn)樣與實驗。該系統(tǒng)可以對多種不同類型表面的分子相互作用和分子吸附進(jìn)行研究,應(yīng)用范圍包括蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、聚電解質(zhì)、高分子和細(xì)胞/細(xì)菌等與表面或與已吸附分子層之間的相互作用。 E4可以測定非常薄層的吸附層的質(zhì)量,并同步提供如粘彈性等結(jié)構(gòu)信息。它基于QCM-D專利技術(shù),非常靈敏和快速,可提供多個頻率和耗散因子數(shù)據(jù),用于充分了解在傳感器表面吸附的分子的狀態(tài)。 *****************測試范圍及優(yōu)勢**************** 1、質(zhì)量測定:測試表面形成的分子層的質(zhì)量,精度達(dá)到毫微克。例如,可檢測到1%或更低濃度蛋白質(zhì)單分子層的結(jié)構(gòu)變化 2、結(jié)構(gòu)變化:同步測試結(jié)構(gòu)變化,因此可以區(qū)分兩個相似的鍵合反應(yīng)或觀察到吸附層上發(fā)生的相轉(zhuǎn)變 3、實時分析:可以進(jìn)行實時記錄和動力學(xué)評估 4、無須標(biāo)記:無須對分子做標(biāo)記,儀器測定的是分子本身 5、柔性的表面選擇:適用于任何能形成薄膜的表面如金屬、高分子、化學(xué)改性表面等 6、流量測試:特別設(shè)計的樣品池可以在控溫環(huán)境下進(jìn)行流量測定 *******************具體應(yīng)用領(lǐng)域如下******************* (1)生物材料表面分析 (2)生物傳感器的研究 (3)蛋白質(zhì)的相互作用 (4)膜表面的吸附/解析 (5)生物膜表面DNA的雜交 (6)酶的降解 (7)聚電解質(zhì)單/多層膜的研究 (8)細(xì)胞在不同表面的吸附 (9)靶向藥物的研究 (10)催化、腐蝕等研究 (11)高分子溶漲、結(jié)構(gòu)改變、等特性的研究 (12)高分子材料的生物相容性等
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產(chǎn)品信息 |
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特點◇ 閃點、燃點高,適用于馬氏體等溫淬火、分級淬火及回火! 在馬氏體相變點附近具有緩慢的冷速,適合要求極小變形工件的淬火冷卻! 使用中油溫的變化對 Mar-Temp 2565 油的冷卻特性影響較小,能保證連續(xù)生產(chǎn)中淬火質(zhì)量的穩(wěn)定! 以溶劑萃取并經(jīng)特殊精煉的石蠟基礦物油為基礎(chǔ)油,含有優(yōu)質(zhì)抗氧化劑,具有良好的熱穩(wěn)定性能和抗高溫老化性能。長期使用性能穩(wěn)定,使用壽命長! 含有特殊的潤濕劑,工件表面潤濕快,冷卻均勻,淬后工件表面色澤均勻。同等使用條件下,淬火消耗量少,運行成本低。典型理化參數(shù)外觀 深棕色油粘度(100℃) 33±4 mm 2 /s密度(20℃) 0.90 g/cm 3閃點(開口),不小于 270℃比熱(37.8℃) 0.46 Cal/℃導(dǎo)熱率(37.8℃) 0.147 W/m.℃灰分 0.3%康氏殘?zhí)?1.5%冷卻特性(油溫 60℃,無攪拌):上特性溫度,不小于 670℃最大冷速典型值 ≥75℃/S
淬火冷卻特性附圖是采用符合 ISO 9950 標(biāo)準(zhǔn)的 Mar-Temp 2565 油在常用溫度下的 IVF 典型冷速特性曲線。典型應(yīng)用◇ Mar-Temp 2565 用于極易變形的滲碳/碳氮共滲處理或整體工件的等溫、分級淬火,比如極薄的圓片狀鋸片、手工工具、量具等以及要求極高的尺寸穩(wěn)定性的類似工件! 黑色金屬、有色金屬以及某些要求具有高回火穩(wěn)定性工件的回火! Mar-Temp 2565 淬火油可以在敞開式、密閉式或整體式爐的淬火槽中使用。◇ Mar-Temp 2565 淬火油的汽化傾向小,既適用于整體爐內(nèi)也適用于在開放式爐中使用! Mar-Temp 2565 淬火油不會皂化,適用于經(jīng)鹽浴爐加熱后的工件的馬氏體分級淬火。使用注意事項◇ Mar-Temp 2565 淬火油的使用溫度為 180~220℃,,溫度升高將顯著加快油品的老化,在滿足變形等要求的情況下,盡量從低使用,推薦在 180~190℃使用,也可在 140~180℃范圍內(nèi)使用。◇ 建議用泵或螺旋槳對淬火油進(jìn)行攪拌。不推薦使用壓縮空氣攪拌,因為它會加速油的氧化! 由于工作溫度高,應(yīng)盡量減少 Mar-Temp 2565 油與空氣的接觸面積。采用適度的攪拌,保證油溫均勻,防止局部過熱。建議在工件淬入的過程中,才對油浴作更強(qiáng)力的攪拌! 加熱器功率不宜大于 1.5 W/cm 2 ,以防過熱并在加熱器上生成聚合物絕緣層而過早失效! 冷凝器、泵以及攪拌器、管道及淬火槽元件等不宜使用銅及銅合金件,以防淬火油的加速氧化和聚合?刹捎娩摷⒉讳P鋼件或鍍鎳、鍍錫件等。◇ 應(yīng)特別注意油中不要混入水分。油中含有水分會造成淬火軟點、工件變形增大甚至開裂等缺陷,并易導(dǎo)致油中出現(xiàn)泡沫,引起著火甚至“爆炸”。◇ 經(jīng) Mar-Temp 2565 淬火油冷卻的工件可以很容易地用 Cerfa-Kleen 5398 等傳統(tǒng)的清洗劑清洗
貨架壽命出廠檢驗合格的產(chǎn)品,應(yīng)在一年期限內(nèi)使用;若超出期限尚未使用,待復(fù)驗合格后方可使用。包裝與存儲Mar-Temp 2565 采用 200 升鐵桶包裝。儲存溫度為 5~40℃,室內(nèi)存儲。
好富頓MAR-TEMP 2565等溫淬火油Houghton Mar-Temp 2565淬火液
特點◇ 閃點、燃點高,適用于馬氏體等溫淬火、分級淬火及回火。◇ 在馬氏體相變點附近具有緩慢的冷速,適合要求極小變形工件的淬火冷卻! 使用中油溫的變化對 Mar-Temp 2565 油的冷卻特性影響較小,能保證連續(xù)生產(chǎn)中淬火質(zhì)量的穩(wěn)定。◇ 以溶劑萃取并經(jīng)特殊精煉的石蠟基礦物油為基礎(chǔ)油,含有優(yōu)質(zhì)抗氧化劑,具有良好的熱穩(wěn)定性能和抗高溫老化性能。長期使用性能穩(wěn)定,使用壽命長! 含有特殊的潤濕劑,工件表面潤濕快,冷卻均勻,淬后工件表面色澤均勻。同等使用條件下,淬火消耗量少,運行成本低。典型理化參數(shù)外觀 深棕色油粘度(100℃) 33±4 mm 2 /s密度(20℃) 0.90 g/cm 3閃點(開口),不小于 270℃比熱(37.8℃) 0.46 Cal/℃導(dǎo)熱率(37.8℃) 0.147 W/m.℃灰分 0.3%康氏殘?zhí)?1.5%冷卻特性(油溫 60℃,無攪拌):上特性溫度,不小于 670℃最大冷速典型值 ≥75℃/S
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