作用機制:
潮霉素B是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。
抗性基因:
對潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)的基因。至今發(fā)現(xiàn)兩種來源:
► Streptomyces hygroscopicus產(chǎn)生的Hph抗性基因;
► Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae內(nèi)質(zhì)粒攜帶的Hph抗性基因(常用);
生物應用:
1) 篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核細胞或真核細胞(植物細胞和哺乳動物細胞);
2) 由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™ 和blasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個不同載體的細胞株;
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抗生素 | 抗性機制 | 抗性基因 | 哺乳動物篩選濃度 |
潮霉素B | 干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀 | Hph | 200~500μg/mL |
G418 | 干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成 | Tn5/Tn601 | 100~1000μg/mL |
Zeocin | 摻入或者切割DNA引起細胞死亡 | Sh ble | 50~100μg/mL |
blasticidin S | 核糖體上抑制肽鍵形成 | Bsd/BSD | 3~50μg/mL |
3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進入因病毒感染增強通透性的細胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4)作為驅(qū)蟲藥加入動物飼料;
應用濃度:
潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,最佳濃度需要殺滅曲線來確定。
哺乳動物細胞·200-500 μg/mL;細菌/植物細胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000 μg/mL;
產(chǎn)品使用:
使用一:殺滅曲線確定最佳殺死濃度(僅作參考,因個人檢測體系而異)
(1)往組織培養(yǎng)級的96孔板內(nèi)加入未轉(zhuǎn)染細胞,細胞密度約50-200細胞/孔;細胞貼壁之后,往每孔加入含不同濃度(如50-1000μg/mL,至少5個濃度)潮霉素B的200μL新鮮培養(yǎng)基;
(2)37℃,5% CO2培養(yǎng)箱孵育細胞10-14天;
(3)培養(yǎng)5-7天后更換新的培養(yǎng)液,培養(yǎng)液內(nèi)含有相應濃度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用細胞增殖方法如MTT,CCK-8等評估細胞活力;也可以通過檢測細胞克隆數(shù)或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的最小濃度為最佳篩選濃度。
使用二:篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞
(1) 對于貼壁細胞,直接吸去60mm培養(yǎng)皿內(nèi)的轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)基,然后加入含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基5-6ml;對于懸浮細胞,無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)基,然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;
(2) 5-7天后,如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;
(3) 再孵育細胞5-7天;
(4) 10-14天孵育后,培養(yǎng)體系中只含有能夠表達潮霉素B抗性表型的活細胞。因此篩選之后如步驟一,更換不含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基。
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荷重 | 250, 500, 1000 g |
計數(shù)器 | LCD 0~999,999 |
體積 | 52×32×31cm+吸塵器 |
重量 | 18kg (不含吸塵器) |
電源 | 1∮,AC220V, 10 A |
選購配備 | GT-7012-T1 砂輪修圓坲 |
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聯(lián)系人:王先生 座機:010-51293098 手機:13466665272或13601025401 傳真:010-80115555 QQ:798395054 MSN:wanglei1983317@hotmail.com/wangdong337@hotmail.com
SPA4865LW進口三角帶一級代理商,空調(diào)機皮帶,耐高溫三角帶,工業(yè)皮帶(窄V帶),耐高溫皮帶,空調(diào)機皮帶,高速防油窄型帶,進口三星三角帶,高速傳動帶,進口三星風機皮帶,防靜電三角帶,三星高速防油三角帶等世界名優(yōu)工業(yè)皮帶亞太地區(qū)總代理。
三角帶的每一個型號規(guī)定了三角帶的斷面尺寸,A型三角帶的斷面尺寸是:頂端寬度13mm、厚度為8mm;B型三角帶的斷面尺寸是:頂端寬度17MM,厚度為10.5MM;C型三角帶的斷面尺寸是:頂端寬度22MM,厚度為13.5MM;D型三角帶的斷面尺寸是:頂端寬度21.5MM,厚度為19MM;E型三角帶的斷面尺寸是:頂端寬度38MM,厚度為25.5MM。對應尺寸(寬*高):O(10*6)、A(12.5*9)、B(16.5*11)、C(22*14)、D(21.5*19)、E(38*25.5)。
不同型號的皮帶輪的槽角在不同直徑范圍下的推薦皮帶輪槽角度數(shù)如下:O型皮帶輪在帶輪直徑范圍在50mm~71mm時為34度;在71mm~90mm時為36度, >90mm時為38度; A型皮帶輪在帶輪直徑范圍在71mm~100mm時為34度,100mm~125mm時為36度;>125mm時為38度; B型皮帶輪在帶輪直徑范圍在 125mm~160mm時為34度;160mm~200mm時為36度,>200mm時為38度; C型皮帶輪在帶輪直徑范圍在200mm~250mm時為34度,250mm~315mm時為36度,>315mm時為38度;D型皮帶輪在帶輪直徑范圍在 355mm~450mm時為36度,>450mm時為38度;E型 500mm~630mm時為36度,>630mm時為38度。
SPA4300LW代表什么?SPA代表三角帶型號,4300代表長度。三角帶的型號有:Y Z A B C D E這幾種,從Y到E,節(jié)寬依次變大。 國標GB/T1154-1997中有詳細解釋。Lw見下:產(chǎn)品名;普通三角帶、窄V帶組成材質(zhì):橡膠、拉力骨架線作用:印刷機械、紡織機械、工廠設備、動力設備、汽車傳動、農(nóng)機傳動、等設備的機械傳動
Lw有效長度 Li 內(nèi)周長度通常型號有: 普通三角帶截型SIZE截面尺寸(Transect size) 可供規(guī)格內(nèi)周長長度(Providable inner-perimeter)
優(yōu)點1,結(jié)構(gòu)簡單,制造、安裝精度要求不高,使用維護方便, 三角帶適用于兩軸中心距較大的場合2,傳動平穩(wěn),噪音低,有緩沖吸振作用3,過載時,傳動帶會在帶輪上打滑,可以防止薄弱零件的損壞,起安全保護作用