作用機(jī)制:
潮霉素B是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細(xì)菌、真菌和高等真核細(xì)胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細(xì)胞。
抗性基因:
對潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)的基因。至今發(fā)現(xiàn)兩種來源:
► Streptomyces hygroscopicus產(chǎn)生的Hph抗性基因;
► Escherichia coli,Klebsiella pneumoniae內(nèi)質(zhì)粒攜帶的Hph抗性基因(常用);
生物應(yīng)用:
1) 篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞(植物細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞);
2) 由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™ 和blasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個不同載體的細(xì)胞株;
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抗生素 | 抗性機(jī)制 | 抗性基因 | 哺乳動物篩選濃度 |
潮霉素B | 干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對mRNA模板的錯讀 | Hph | 200~500μg/mL |
G418 | 干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成 | Tn5/Tn601 | 100~1000μg/mL |
Zeocin | 摻入或者切割DNA引起細(xì)胞死亡 | Sh ble | 50~100μg/mL |
blasticidin S | 核糖體上抑制肽鍵形成 | Bsd/BSD | 3~50μg/mL |
3)抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4)作為驅(qū)蟲藥加入動物飼料;
應(yīng)用濃度:
潮霉素B用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL,最佳濃度需要殺滅曲線來確定。
哺乳動物細(xì)胞·200-500 μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞·100-300 μg/mL;真菌·300-1000 μg/mL;
產(chǎn)品使用:
使用一:殺滅曲線確定最佳殺死濃度(僅作參考,因個人檢測體系而異)
(1)往組織培養(yǎng)級的96孔板內(nèi)加入未轉(zhuǎn)染細(xì)胞,細(xì)胞密度約50-200細(xì)胞/孔;細(xì)胞貼壁之后,往每孔加入含不同濃度(如50-1000μg/mL,至少5個濃度)潮霉素B的200μL新鮮培養(yǎng)基;
(2)37℃,5% CO2培養(yǎng)箱孵育細(xì)胞10-14天;
(3)培養(yǎng)5-7天后更換新的培養(yǎng)液,培養(yǎng)液內(nèi)含有相應(yīng)濃度的潮霉素B;
(4)10-14天后使用細(xì)胞增殖方法如MTT,CCK-8等評估細(xì)胞活力;也可以通過檢測細(xì)胞克隆數(shù)或百分比匯合率來確定毒性效應(yīng)。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細(xì)胞的最小濃度為最佳篩選濃度。
使用二:篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞
(1) 對于貼壁細(xì)胞,直接吸去60mm培養(yǎng)皿內(nèi)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)基,然后加入含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基5-6ml;對于懸浮細(xì)胞,無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉(zhuǎn)染細(xì)胞培養(yǎng)基,然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;
(2) 5-7天后,如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基;
(3) 再孵育細(xì)胞5-7天;
(4) 10-14天孵育后,培養(yǎng)體系中只含有能夠表達(dá)潮霉素B抗性表型的活細(xì)胞。因此篩選之后如步驟一,更換不含潮霉素B的新鮮培養(yǎng)基。
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COD在線監(jiān)測儀優(yōu)良特點:
(1) 結(jié)構(gòu)簡單,精致,外部超強(qiáng)耐腐蝕材料制成;
(2) 符合國標(biāo)(GB11914-89),與手動分析有很好的相關(guān)性,誤差在8 %以內(nèi);
(3)采用PLC的可編程控制器控制,運(yùn)行穩(wěn)定,實際平均無故障運(yùn) 行時間大于3600小時;
(4)彩色觸摸屏,中文人機(jī)對話菜單,圖象數(shù)據(jù)直觀清晰,操作簡單;
(5)內(nèi)置等比例采樣系統(tǒng),量程可達(dá)20mg/L—25000mg/L;
(6)智能故障自診斷系統(tǒng),儀器管理和維護(hù)十分方便;
(7)溫度自動調(diào)節(jié),防靜電,消除電磁場和震動干擾等特有技術(shù);
(8)監(jiān)測時間20-120分鐘自行設(shè)定,任意時間間隔自動檢查;
(9)兼容國家環(huán)境信息系統(tǒng);
(10)儀器設(shè)計壽命15年,運(yùn)行費用及維護(hù)率低,適用范圍廣;
(11)標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)接口,開放式的接口設(shè)計,兼容性好,可實現(xiàn)數(shù)據(jù)共享及多種方式遠(yuǎn)程控制。
pH 測量范圍 | 0-14 |
溫度測量范圍 | 0-100°C |
參比結(jié)構(gòu) | ROSS |
液接界 | Sleeve |
電極尺寸 | 120 mm x 12 mm |
pH 精度 | 0.01 |
電極填充液 | 3 M KCI |
WT2纖瘦型漫反射式光電開關(guān)、增強(qiáng)型,高精度背景遮蔽,紅色光源.檢測距離:2…55mm 型號 WT2S-P111 WT2S-P131 WT2S-P211 WT2S-P231 WT2S-N111 WT2S-N131 WT2纖瘦型鏡反射式光電開關(guān)、紅色光源 檢測距離:0.8m/PL20A 型號 WT2S-P161 WT2S-N161 WL2纖瘦型鏡反射式光電開關(guān),紅色光源。檢測距離:0.8m/PL20A 型號 WL2S-F111 WL2S-E111 WS/WE2對射式光電開關(guān),紅色光源。檢測距離:1.2m 型號 WS/WE2S-F113 WS/WE2S-E113 WT4-2漫反射光電開關(guān)、背景遮蔽,紅色光源,亮通/暗通-DC電源。檢測距離:4…130mm,可調(diào)校。 型號 WT4-2P132 WT4-2P330 WT4-2P331 WT4-2N132 WT4-2N330 WT4-2N331 WT4-2P430 WT4-2E132 WT4-2E330 WT4-2E331 WT4-2F132 WT4-2F330 WT4-2F331 WL4-2鏡反射式光電開關(guān),紅色光源,亮通/暗通選擇-DC電源。 檢測距離:2.8m/PL80A 型號 WL4-2P132 WL4-2P330 WL4-2P331 WL4-2N132 WL4-2N330 WL4-2N331 WL4-2P430 WL4-2E132 WL4-2E330 WL4-2E331 WL4-2F132 WL4-2F330 WL4-2F331 WL4G-2鏡反射光電開關(guān),檢測透明物體,紅色光源,-DC電源。 檢測距離:1.6m/PL80A 型號 WL4G-2F330 WS/WE4-2對射式光電開關(guān),亮通-DC電源。 檢測距離:0…4m 型號 WS/WE4-2P132 WS/WE4-2P330 WS/WE4-2P331 WS/WE4-2N132 WS/WE4-2N330 WS/WE4-2N331 WS/WE4-2對射式光電開關(guān),暗通-DC電源。 檢測距離:0…4m 型號 WS/WE4-2E132 WS/WE4-2E330 WS/WE4-2E331 WS/WE4-2F132 WS/WE4-2F330 WS/WE4-2F331 WT4-2(Teflon)漫反射式光電開關(guān),背景遮蔽,紅色光源,亮通-DC電源 檢測距離:4…80mm,固定的。 型號 WT4-2P132 T01 WT4-2N132 T01 WS/WE4-2(Teflon)對射 式光電開關(guān),暗通-DC電源 檢測距離:0…3mm 型號 WS/WE4-2F T01 WS/WE4-2E T01 WS/WE4-2P T01 WT9-2漫反射光電開關(guān),背景遮蔽 檢測距離:30…250mm 型號 WT9-2P110 WT9-2P130 WT9-2P330 WT9-2P410 WT9-2P430 WT9-2P630 WT9-2N130 WT9-2N430 WT9-2漫反射式光電開關(guān),增加型,自學(xué)習(xí)模式,DC電源 檢測距離,可調(diào)校:10…450mm 型號 WT9-2P151 WT9-2P351 WT9-2P451 WT9-2P651 WT9-2N151 WT9-2N451 WT9-2漫反射式光電開關(guān),增加型 檢測距離,可調(diào)校:50…1500mm 型號 WT9-2P160 WT9-2P460 WT9-2N160 WT9-2漫反射式光電開關(guān),V-型,自學(xué)習(xí)模式,DC電源 檢測距離,可調(diào)校:10…20mm 型號 WT9-2P141 WT9-2P341 WT9-2P441 WT9-2P641 WT9-2N141 WT9-2N441 WL9-2鏡反射式光電開關(guān),基本型,紅色光源,DC電源 檢測距離,典型最大/配反射鏡 :4m/PL801A 型號 WL9-2P130 WL9-2P330 WL9-2P430 WL9-2P630 WL9-2N130 WL9-2N330 WL9-2N430 WL9-2鏡反射式光電開關(guān),自學(xué)習(xí)模式,紅色光源,DC電源 檢測距離,典型最大/配反射鏡:4m/PL80A 型號 WL9-2P131 WL9-2P331 WL9-2P431 WL9-2P631 WL9-2N131 WL9-2N431 WL9-2鏡反射式光電開關(guān),焦點35mm,自學(xué)習(xí)模式,DC電源 檢測距離,典型最大/配反射鏡:0.4m/PL80A 型號 WL9-2P121 WL9-2P321 WL9-2P421 WL9-2P621 WL9-2N121 |
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DELL服務(wù)器SC1435
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